Подготовка к анализу на коклюш

Заразные болезни с воздушно-капельным механизмом передачи широко распространены среди людей различных возрастов. Особое место занимают так называемые детские инфекции. Среди них есть и такие, которые создают серьезные риски для ребенка, например, коклюш. И крайне важно вовремя выявить патологию, в чем сильно помогают лабораторные методы исследования. Анализ на коклюш и паракоклюш становится определяющим в постановке правильного диагноза.

Общие сведения

Еще до недавнего времени коклюш считался очень опасной инфекцией. Но даже на современном уровне развития медицины он может протекать довольно тяжело. Болеют в основном дети, заражаясь от сверстников. Возбудитель инфекции – бактерия Bordetella pertussis, целью которой является поражение дыхательных путей. Основным симптомом коклюша считается сильный приступообразный кашель, принимающий характер спазматического. Он беспокоит чаще всего вечером и ночью, а при прогрессировании болезни – и днем. Во время кашля ребенку трудно вдохнуть, его лицо краснеет и даже синеет, отекает, расширяются сосуды конъюнктивы. Приступ обычно заканчивается отхождением стекловидной мокроты или рвотой.

Коварство инфекции заключается в том, что она начинается как обычная простуда. Незначительное покашливание зачастую даже не сопровождается повышением температуры, общее состояние детей не страдает. Но затем приступы становятся все тяжелее. Усугубляют ситуацию токсины, выделяемые бактерией в кровь. Они могут привести к поражению головного мозга (гипоксическая энцефалопатия). Осложнениями коклюша также становятся: легочное сердце и ателектаз, конъюнктивальные кровоизлияния, инсульт. Из-за сниженного иммунитета может присоединиться вторичная инфекция (пневмония).

Паракоклюш вызывается другой, но очень схожей бактерией (Bordetella parapertussis). Поэтому она вызывает практически те же симптомы. Болезнь протекает в более легкой форме, но также характеризуется приступами сухого кашля, иногда рвотой и затруднением дыхания. Поэтому у детей параллельно выполняют анализ и на паракоклюш.

Показания

Причиной для назначения лабораторных анализов является не только подозрение на коклюш или паракоклюш. Исследование также показано детям с приступообразным кашлем, болеющим на протяжении 7 дней, тем, у кого наблюдаются эпизоды апноэ (остановки дыхания) или одышки, при сохранении симптомов более двух недель. Взятие биоматериала производится и по эпидемическим показаниям у пациентов, контактировавших с больным ребенком.

Проведение

При подозрении на коклюш или паракоклюш диагноз не может быть поставлен лишь на основании клинических данных. Поэтому выполняют различные лабораторные исследования. К наиболее распространенным относятся:

• Общий анализ крови.
• Мазок из носоглотки (микроскопия, посев).
• Серологический анализ.
• Молекулярно-генетический метод.

Каждое исследование имеет определенные особенности, требующие отдельного рассмотрения. Какой анализ нужно сдавать пациенту, скажет врач. Специалист проведет клиническое обследование и делает предварительное заключение, на основании которого проводится дальнейшая диагностика. Он выдает направление на лабораторные тесты.

Целесообразность анализов и их объем определяется врачом. Диагностику необходимо пройти в кратчайшие сроки, поскольку от ее результатов всецело зависит лечение.

Общий анализ крови

Для проведения общего анализа пациент приходит в лабораторию натощак. Другой подготовки не требуется. Кровь берется из пальца в тонкую стеклянную трубочку-капилляр. Затем медработник подсчитывает количество форменных элементов, гемоглобина, определяет СОЭ и цветной показатель. Срок выполнения составляет 1 сутки. Безусловно, это неспецифический анализ, который проводят при многих заболеваниях.

Мазок из носоглотки

Важным анализом на коклюш у детей является мазок из носоглотки. Он позволяет оценить клеточный состав слизи и выявить в ней патогенные микробы. Перед взятием биоматериала не рекомендуют:

• Полоскать горло, чистить зубы.
• Принимать антибиотики, закапывать нос.
• Сильно высмаркиваться.
• За 2–3 часа принимать пищу и пить воду.

Исследование проводится на ранних сроках болезни (не позже 3 недель с момента начала), в противном случае результаты могут быть ложноотрицательными. Мазок берется стерильным тупфером – ватным тампоном на длинной палочке – отдельно из носа и горла. Ребенку следует широко приоткрыть рот и немного запрокинуть голову назад. Одним тупфером проводят по задней стенке глотки и миндалинам, а другой вводят в носовые ходы. Тампоны помещаются в пробирки со специальной транспортировочной средой, которая будет поддерживать жизнедеятельность бактерий.

Для цитологии материал наносится на предметное стекло, фиксируется и окрашивается по Грамму. Затем картина описывается под микроскопом. А вот бакпосев – это более длительный анализ. Возбудителю коклюша нужна специфическая питательная среда (кровяной агар). На нее засевается слизь из носоглотки, а затем все инкубируется в термостате. Появившиеся колонии микробов оценивают морфологически и функционально (ферментативная активность, скорость роста).

Материала от пациента можно получить и по-другому – методом «кашлевых пластинок». Тогда открытую чашку Петри с питательной средой подносят к больному ребенку. И в момент кашля слизь сама попадает на нее. Это позволяет исключить этапы взятия мазка и рассевания.

Серологический анализ

Серологическая диагностика коклюша основана на определении антител к возбудителю. Анализ крови на коклюш включает идентификацию в плазме различных классов иммуноглобулинов (A, M, G). Каждый из них показывает, насколько сильно идет защитная реакция со стороны организма. Антитела класса А являются секреторными, они обеспечивают местную защиту слизистых оболочек. Иммуноглобулин M начинает вырабатываться уже спустя 10–14 дней от момента инфицирования. А вот антитела класса G продуцируются значительно позже (через 3–4 недели). Кровь для анализа берется у ребенка из вены натощак.

Детекция антител производится методом иммуноферментного анализа (ИФА). В его основе лежит специфическая реакция между антигеном и антителом. Сыворотку, полученную от пациента, по капле помещают в ячейки иммунологического планшета, в которых уже есть стандартные антигены к Bordetella pertussis. Затем в образовавшийся комплекс подмешивают антитела к иммуноглобулинам, меченные специальным ферментом. Последний при обнаружении гомологичных молекул расщепляет бесцветное вещество (хромоген), придавая раствору в ячейках окраску. Ее интенсивность как раз и определяется количеством антител в крови пациента. Подсчет концентрации происходит в фотометрических анализаторах.

Серологический метод является очень распространенным исследованием, позволяющим определить антитела к инфекционным болезням.

Молекулярно-генетический метод

Метод полимеразной цепной реакции – еще один анализ, проводимый при коклюше. Он основывается на определении генетического материала (ДНК) бактерии-возбудителя. Для этого анализа берется соскоб из ротоглотки: стерильным тупфером проводят по слизистой оболочке. В лаборатории к биоматериалу добавляются специальные вещества (праймеры, ферменты), которые позволяют многократно копировать фрагменты нуклеиновых кислот. Все это происходит в приборе под названием амплификатор. Он же оборудован и детектором для идентификации генетических цепей микроорганизмов. ПЦР диагностика коклюша – наиболее сложный, но в то же время и самый чувствительный метод, многократно повышающий достоверность анализов.

Результаты

После того как кровь на коклюш или мазки слизи сданы, придется подождать результатов. Время, необходимое для проведения каждого исследования, отличается. Например, если для общего анализа крови и микроскопии требуются всего сутки, то для других тестов нужно больше времени. При этом следует учитывать, что день, в который сдаются пробы, обычно не учитывается. Но в экстренных случаях все производится, конечно, быстрее.

Каждый анализ может показать, что в организме присутствует возбудитель коклюша и паракоклюша. Только одни более специфичны, а другие – менее. Результаты выдаются лабораторией на специальном бланке, где указаны фактические значения и референсные. Поэтому, сравнив их, можно сделать предположение о происхождении изменений в организме. Но следует учитывать, что расшифровка результатов производится только врачом.

Общий анализ крови

Наименьшей специфичностью обладает клинический анализ крови при коклюше у детей. В нем отмечается уменьшение числа лейкоцитов (лейкопения), относительное повышение лимфоцитов. СОЭ не реагирует или немного падает. Такая картина характерна для катаральной стадии заболевания. Следует учитывать, что степень изменений пропорциональна тяжести состояния. У пациентов со стертыми формами болезни, привитых или в период выздоровления все может быть в пределах нормы.

Мазок из носоглотки

Микроскопически Bordetella pertussis выглядит как грамотрицательная (розовая) палочка. Но чтобы сказать точно, нужно посмотреть на результаты посева. На питательной среде она растет в форме мелких круглых колоний с блестящей поверхностью, образуя зону гемолиза. Ферментативной активностью не обладает. Выявление роста говорит о позитивном анализе и подтверждает коклюш. Дополнительно оценивается чувствительность бактерии к наиболее распространенным антибиотикам.

Получение чистой культуры коклюшных палочек свидетельствует о болезни ребенка и требует соответствующего реагирования со стороны врача.

Серологический анализ

Определение антител к возбудителю инфекции – метод с довольно высокой специфичностью. Но расшифровка анализа на коклюш зависит от времени взятия биоматериала, продолжительности болезни и состояния общего иммунитета. Есть два метода определения иммуноглобулинов: качественный и количественный. При первом результат содержит лишь слова «отрицательно», «положительно» или «сомнительно». А во втором случае есть цифры, указывающие, сколько именно антител выявлено в крови пациента. Зачастую они написаны в анализе вместе. Но в лабораториях используют различные реагенты и тест-системы, поэтому назвать конкретные цифры сложно. Например, при использовании анализаторов EUROIMMUN (Германия) верхние границы нормы следующие (таблица):

Поэтому, когда в анализе IgM превышают 0,8, а IgG уже 40, то результат положителен, а инфекция однозначно есть. В более общем виде диагностическими критериями коклюша при ИФА будут:

• У взрослых и привитых детей: увеличение в 4 и более раз IgG и IgA.
• У детей, не привитых от болезни: даже однократное обнаружение любых антител.

Следует понимать, что при выявлении иммуноглобулинов М коклюш находится в острой фазе (активная инфекции), но это же свидетельствует и о недавней вакцинации. Антитела класса G указывают на продолжительность текущей болезни, перенесенную в прошлом патологию или сформированную защиту после активной иммунизации. А секреторные IgA говорят о том, что ребенок на момент проведения анализа болен коклюшем. В сомнительных случаях необходимо сделать повторное исследование. Если он окажется отрицательным, то и повода для переживаний не будет.

Молекулярно-генетический метод

Результат ПЦР-диагностики является наиболее чувствительным и специфичным. Он может быть либо положительным, либо отрицательным. В первом случае выявлен генетический материал Bordetella pertussis (parapertussis), что однозначно свидетельствует о заболевании. Но и во втором случае исключать такую вероятность нельзя, ведь в исследуемом биоматериале просто могло не оказаться бактерий или их ДНК было меньше, чем положено для выполнения анализа. Поэтому большую роль играет правильное взятие слизи.

Выбор лаборатории

Многих интересует вопрос, где сдать анализ на коклюш. Но выбор лаборатории может оказаться довольно непростым занятием. Как видим, каждое исследование имеет массу нюансов и для получения достоверного результата важно соблюдение различных условий: техники и времени взятия материала, правил его хранения и транспортировки, подготовки к анализу. В крупных и сетевых лабораториях (например, в Инвитро) эти процессы четко отлажены и контролируются. Поэтому следует внимательно отнестись к указанному вопросу, ведь от него может зависеть точность диагноза.

Несмотря на повсеместную вакцинацию, случаи коклюша не являются редкостью. Но выявить и подтвердить заболевание можно лишь лабораторными методами, которые прямо или косвенно укажут на присутствие возбудителя в организме ребенка. К проведению анализов следует отнестись со всей серьезностью, ведь их результаты однозначно повлияют на дальнейшее лечение.