Методика посева на коклюш

Содержание статьи

Анализ на коклюш — какой сдать?

Для диагностики коклюша в современное время доступно большое количество тестов и анализов, но как правильно выбрать необходимый и самый точный из них?

Итак, многие специалисты по всему миру рекомендуют:

Если кашель у подростков и взрослых длится менее двух недель, а у детей менее трёх недель то, целесообразно воспользоваться микробиологическими методами (посев) или методами амплификационной диагностики (полимеразно-цепная реакция, ПЦР) [1,2].

Если кашель у детей и взрослых длится более двух недель и в течение текущего года не проводилась вакцинация против коклюша то, целесообразно воспользоваться серологическими методами диагностики (например, иммуноферментным анализом, ИФА) [1,2].

Теперь немного подробнее о важных особенностях каждого метода.

1. Полимеразно-цепная реакция (ПЦР).

Необходимый материал для анализа — назофарингеальный мазок, но предпочтительнее использовать образец слизи из носоглотки [3]. Как правильно выполнить мазок представлено в нашем канале в телеграме (@pediatrics_rus).

ПЦР необходимо проводить в течение первых двух-трёх недель от начала кашля, так как спустя четыре недели от начала заболевания количество бактерий B.pertussis в носоглоточном секрете стремительно снижается, также количество бактерий снижается, если проводилась антибактериальная терапия (более 5 дней [4]).

У младенцев и ранее не привитых детей ПЦР допустимо выполнять в течение первых четырёх недель от начала кашля [4,5].

Для большей точности ПЦР всегда рекомендуется проводить параллельно с посевом [1], следовательно, при заборе материала следует брать два образца одномоментно — один для ПЦР, другой для посева. Зачем? ПЦР может давать ложноположительные результаты, так как определяет только наличие или отсутствие ДНК возбудителя, а не наличие живых форм [6].

При заборе ПЦР рекомендуется пользоваться палочками из нейлона, рэйона и полиэстера. При использовании хлопковой ваты возбудитель гибнет [7].

При подозреваемом коклюше важно проводить дифференциальную диагностику с аденовирусной, бокавирусной инфекциями, гриппом, парагриппом, M.pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae и прочими инфекциями [8].

ПЦР не рекомендуется проводить лицам, контактировавшим с больным коклюшем при отсутствии каких-либо симптомов [7].

2. Посев.

Посев на питательную среду — золотой стандарт диагностики коклюша [1-4].

Высокая вероятность получения наиболее точного результата отмечается у лиц, страдающих кашлем менее двух недель, если для лечения ещё не применялись антибактериальные препараты и, если вакцинация против коклюша проводилась более 12 месяцев назад [4].

Необходимый материал для проведения посева — отделяемое носоглотки.

Возбудитель коклюша — B.pertussis является очень чувствительным и привередливым микроорганизмом, поэтому рекомендуется, чтобы медперсонал строго следовал инструкции и соблюдал технику забора материала для анализа.

В среднем результат посева может быть готов через 4-10-14 дней [9,10], всё зависит от возможностей лаборатории. У ранее не болевших и не привитых против коклюша предварительный результат посева может быть готов уже через 72-96 часов [9,11].

Большим преимуществом посева является то, что можно определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам и, следовательно, правильно подобрать препараты для последующего лечения. Кроме того, по данным посева, можно определить, какой конкретно штамм бактерии циркулирует на определённой территории и оценить эффективность применяемой вакцины [12].

3. Иммуноферментный анализ (ИФА).

В случае поздней диагностики, когда кашель длится более 3-4 недель и/или уже начата или проведена антибиотикотерапия, для лабораторного подтверждения коклюша можно воспользоваться серологическими методами диагностики, например, иммуноферментным анализом (ИФА).

При помощи ИФА можно определять антитела классов IgM, IgA и IgG к различным антигенам возбудителя: коклюшному токсину (PT), филаментозному гемагглютинину (FHA), пертактину (PRN). Наиболее специфичным антигеном является коклюшный токсин, так как это единственный антиген, который характерен только для B.рertussis [12]. Остальные антигены могут присутствовать и у других представителей Bordetella.

У 25% младенцев и 10% подростков антитела к коклюшному токсину (РТ) могут отсутствовать [2,3].

Серологическое исследование для диагностики коклюша можно использовать с 3 до 12 недель с момента начала кашля [13,14]. Материалом для исследования является кровь.

Лабораторная диагностика коклюша и рекомендуемые временные интервалы для выполнения различных анализов

Какой класс антител лучше определять?

1. Антитела класса IgM.

Свидетельствуют об остром инфекционном процессе.
Образуются не раньше второй недели от начала заболевания, следовательно, их определение раньше этого срока нецелесообразно [9,14].
У некоторых детей и взрослых независимо от наличия вакцинации или перенесённого ранее заболевания антитела класса IgM могут вырабатываться в малом количестве и не определяться по данным анализа [9].
Если определение IgM проводилось в первые две недели от начала заболевания и результат был отрицательным, то рекомендуется повторить анализ спустя 10-14 дней. Если отрицательный результат получен спустя 14 дней от начала заболевания, то смысла переделывать анализ нет, так как с течением времени количество IgM только уменьшается.

2. Антитела класса IgG.

Обнаруживаются на третьей неделе от начала заболевания, достигают своего наибольшего значения на 6-8 неделе болезни, после чего их уровень постепенно снижается [9].

Определение специфических IgG является наиболее распространённым и стандартизированным методом при серологической диагностике коклюша [2,3]

Для более точной диагностики при определении IgG рекомендуется использовать парные сыворотки, так как по данным одного анализа сложно сделать достоверный вывод, ведь неизвестно с чем связано присутствие IgG — с заболеванием или проведенной ранее вакцинацией.
Рекомендуемый интервал между исследованиями составляет 10-14 дней. Результат считается положительным при нарастании титра в 2-4 и более раз [3,9,15].

Определение титра антител — оптимальный метод диагностики коклюша у ранее иммунизированных подростков и взрослых [1,9].

Определение IgG рекомендуется, если в течение текущего года (12 месяцев) не проводилась вакцинация против коклюша [1,9].

При исследовании однократно взятой сыворотки (даже у ранее привитого более 12 месяцев назад взрослого или ребёнка) результат по обнаружению антител класса IgG может быть расценен как положительный только в случае высокого титра (точное значение необходимо уточнять в лаборатории, так как данные разнятся в зависимости от техники анализа и используемых реагентов) [14].

Во вкладке «Дополнительные материалы» ниже можно скачать памятку об особенностях лабораторной диагностики коклюша в формате pdf.

4. Клинический анализ крови.

В общем анализе крови при коклюше характерно увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов [1-4]. Количество лимфоцитов увеличивается под действием токсина коклюшной палочки [2], однако отсутствие повышения лейкоцитов не исключает коклюш. Клинический анализ крови является только дополнительным методом диагностики [5].

Имеются данные, что если по результатам клинического анализа крови у ребёнка определяется более 10 000 лейкоцитов в 1 мкл и более чем 50% из них составляют лимфоциты, то диагноз коклюша можно рассматривать как вероятный (конечно, при наличии характерной клинической картины) [16]. Если в повторном анализе — через 24 часа — отмечается повышение лейкоцитов более 20 000 в 1 мкл и из них более чем 50% лимфоцитов, то это свидетельствует о том, что вероятность коклюша крайне высока [16].

При оценке клинического (общего) анализа крови у маленьких детей также следует помнить, что если в течение беременности мама младенца прививалась от коклюша, то повышения лейкоцитов может и не быть [16].

5. Дополнительные обследования.

В связи с риском развития осложнений у детей первого года жизни в случае госпитализации рекомендуется выполнять рентгенографию органов грудной клетки (из-за риска пневмонии) и эхокардиограмму (из-за риска лёгочной гипертензии). Остальные исследования — по показаниям.

Подробнее о симптомах коклюша и его лечении можно прочитать в наших статьях по тегу #коклюш.

Источник

Лабораторная диагностика коклюша и паракоклюша

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель — Bordetella pertussis (палочка Борде — Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме — лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш — это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

Референсные значения

1. anti-Bordetella pertussis

Результат: отрицательный.

Титр: 1:80 — условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 — условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Результат: отрицательный.

Титр:

3. Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

коклюш;
паракоклюш;
транзиторное носительство;
иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

отсутствие коклюша/паракоклюша;
неэффективная вакцинация против коклюша;
снижение иммунологического ответа после вакцинации;
ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
предшествующая вакцинация.

Важные замечания

При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Литература

Ghanaie RM, Karimi A, Sadeghi H, Esteghamti A, Falah F, Armin S, Fahimzad A, Shamshiri A, Kahbazi M, Shiva F. Sensitivity and specificity of the World Health Organization pertussis clinical case definition / Int J Infect Dis. 2010 Dec;14(12):e1072-5.
Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
Piekarska K, Rzeczkowska M, Rastawicki W, Dąbrowska-Iwanicka A, Paradowska-Stankiewicz I.Usefulness of laboratory methods in diagnosis of pertussis in adult with paroxysmal cough / Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.
Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша. — Методические рекомендации МР 3.1.2.0072-13.

Источник

Взятие материала из носоглотки на менингококк и коклюш

Цель: собрать материал для бактериологического исследования.

Показания:

обследование детей с подозрением на менингококковую инфекцию, коклюш;
обследование контактных в период карантина;
выявление бактерионосителей.

Противопоказания: нарушениецелостности слизистых оболочек верхних дыхательных путей.

Оснащение:

резиновые перчатки, маска;
стерильная пробирка с сухим ватным изогнутым тампоном (если тампон не изогнут, извлеките его на 2/3 длины и слегка изогните о внутреннюю стенку пробирки под углом ˚135 на расстоянии3-4 см от нижнего конца и вновь поместите в стерильную пробирку);
штатив для пробирок;
стерильный штапель в лотке;
бланк — направление в лабораторию.

Обязательные условия:

пробирки с тампоном на металлической петле хранить в холодильнике и использовать в течение 2-3 дней (на пробирке должна быть указана дата изготовления);
забор материала из носоглотки проводить натощак, до орошения или полоскания горла.

Этапы	Обоснование
Подготовка к манипуляции
1. Объяснить маме/ребенку цель и ход предстоящей манипуляции, получить согласие	Обеспечение права на информацию, участие в исследовании
2. Подготовить необходимое оснащение. Выписать направление в бактериологическую лабораторию	Обеспечение четкости выполнения исследования
3. Вымыть и осушить руки, надеть маску, перчатки	Обеспечение инфекционной безопасности
4. Поставить на инструментальный столик необходимое оснащение (расположив по правую руку)	Создание удобства для проведения исследования
5. Усадить ребенка лицом к источнику света и при необходимости зафиксировать его с помощью помощника: а) ноги ребенка помощник обхватывает своими ногами; б) руки и туловище фиксирует одной рукой; в) голову держит, положив ладонь другой руки на лоб ребенку	Необходимое условие для проведения исследования

Выполнение манипуляции
1. Попросить ребенка широко открыть рот и штапелем нажать на корень языка Примечание: ребенку младшего возраста открыть рот с помощью шпателя, взяв его как писчее перо левой рукой, ввести в ротовую полость до зубов, повернуть ребром и провести по боковой поверхности десен до места окончания зубов, после чего перевернуть его плашмя, поместить на корень языка и резко нажать на него	Обеспечение доступа для проведения исследования
2. Извлечь ватный тампон из пробирки, взяв его правой рукой за пробку, в которую он вмонтирован	Обеспечение достоверности результата
3.Осторожно, не касаясь языка, зубов, слизистой оболочки полости рта, ввести тампон по штапелю: — изогнутым концом вверх, под мягкое небо (за язычок) в носоглотку при обследовании на менингококк; — изогнутым концом вниз по задней стенке при обследовании на коклюш	Место максимальной локализации данных бактерий
4. Двумя-тремя легкими движениями собрать слизь с задней стенки глотки	Условие, обеспечивающее эффективность
5.Извлечь тампон из ротовой полости и поместить в пробирку, не касаясь ее краев	Обеспечение достоверности результата
Завершение манипуляции
1.Вымыть и обработать антисептическим раствором руки в перчатках, снять их. Вымыть и осушить руки.	Обеспечение инфекционной безопасности
2. На менингококк — немедленно отправить материал в бактериологическую лабораторию в сопровождении направления при температуре 36-39˚С (в контейнерах с грелками). На коклюш — доставить в бактериологическую лабораторию не позднее 5 ч после забора материала	Обеспечение достоверности исследования. Менингококк и палочка Борде-Жангу неустойчивы во внешней среде

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Источник