Коклюш в чашке петри

1. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Обследованию подлежат: 1) пациенты с диагнозом «коклюш» или «коклюш?»; 2) дети, бывшие в контакте с больным коклюшем, при наличии у них кашля; 3) бактерионосители после их санации.

Наиболее часто возбудитель высевается в первые 2 недели заболевания. Взятие материала производят натощак или через 2–3 ч после еды, полоскания полости рта антисептическими растворами. При доставке в лабораторию его необходимо беречь от охлаждения. Результат посева получают через 72 ч.

Бактериологическое обследование больных коклюшем проводится в отделении инфекционного стационара. Обследование детей, контактировавших с пациентом, заболевшим коклюшем, осуществляется в территориальных бактериологических лабораториях.

2. МАТЕРИАЛЬНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ

2.1. Смотри инструкцию №1.

2.2. Дополнительно:

МИ: стерильная пробирка с транспортной средой с глоточным тампоном (ватный тампон на металлическом стержне) однократного использования в упаковке;

чашка Петри с питательной средой;

шпатель в упаковке;

штатив для пробирок;

контейнер для транспортировки пробирок;

грелка с теплой водой;

термометр для воды;

маркер по стеклу.

Пеленка.

3. ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ

ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЙ ЭТАП

3.1. Подготовить рабочее место согласно Инструкции №1.

3.2. Проинформировать пациента (законного представителя) о необходимости выполнения процедуры.

3.3. Проверить оформление направления.

3.4. Отметить маркером по стеклу номер на пробирке, соответствующий номеру в направлении.

3.5. Установить пробирку в штатив.

3.6. Заполнить грелку теплой водой (температура воды 40°), обернуть пеленкой, уложить ее на дно контейнера для транспортировки пробирок.

3.7. Провести гигиеническую антисептику рук. Надеть маску, перчатки.

ОСНОВНОЙ ЭТАП

3.8. Усадить ребенка к источнику света. Детей младшего возраста фиксирует помощник.

3.9. Взятие материала с помощью глоточного тампона (1-ый метод):

3.9.1. предложить ребенку широко открыть рот;

3.9.2. извлечь из пробирки с транспортной средой тампон, осторожно согнув его о край пробирки под углом 135°;

3.9.3. прижать язык шпателем и по шпателю ввести тампон в глотку, повернуть загнутый конец вниз и веерообразным движением, коснувшись 2–3 раза слизистой глотки, взять материал. Осторожно извлечь тампон, не касаясь слизистой оболочки рта и зубов.

3.9.4. Не касаясь краев пробирки, вернуть тампон в пробирку с транспортной средой.

3.10. Взятие материала с помощью метода «кашлевых пластинок» (2-ой метод):

3.10.1. Взять чашку Петри. При появлении кашля открыть ее и держать на расстоянии 10–12 см от рта пациента, улавливая 8–9 кашлевых толчков. При отсутствии кашля вызвать кашлевую реакцию, надавливая шпателем на корень языка.

3.10.2. Быстро закрыть чашку Петри и поставить в контейнер. При непродолжительном кашле у детей грудного возраста процедуру с чашкой Петри можно повторить.

ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЙ ЭТАП

3.11. Провести дезинфекционные мероприятия в соответствии с Инструкцией №2.

3.12. Направление поместить в полиэтиленовый (клеенчатый) пакет. Номер в направлении и на пробирке должен соответствовать номеру в регистрационном журнале.

3.13. Срочно транспортировать взятый материал в контейнере в бактериологическую лабораторию1.

3.14. Снять перчатки, провести гигиеническую антисептику рук.

Date: 2015-07-02; view: 5348; Нарушение авторских прав

Техника взятия материала на коклюш и первичный посев на среду. Техника взятия. Название среды.

Цель исследования: выявление возбудителя и дифференциация возбудителей коклюша и паракоклюша.

1. Метод кашлевых пластинок (Борде)

Оборудование: чашка Петри с питательной средой (КУА)

Ход работы:

· Усаживаем пациента на стул

· В момент появления кашля подносим открытую чашку Петри с питательно средой ко рту пациента на расстоянии 8-10см, удерживаем несколько секунд.

· Закрываем чашку и ставим в термостат.

2. Заднеглоточный способ взятия материала и первичный посев на чашку с питательной средой (КУА)

Оборудование: 2 стерильных тампона, растопленная на водяной бане среда КУА, стерильный шпатель.

Ход работы:

1. Усаживаем пациента

2. Вынимаем первый тампон из пробирки и сгибаем под углом 120*.

3. Просим обследуемого открыть рот.

4. Вводим в рот шпатель и прижимаем им корень языка.

5. Вводим в рот первый (сухой) тампон до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки.

6. После появления у обследуемого кашлевого рефлекса и выделения слизи вынимаем тампон из полости рта.

7. Делаем первичный посев на среду КУА в чашку Петри.

8. Сначала делаем несколько штрихов в одном месте, затем растираем материал по всей поверхности среды, со всех сторон тампона.

9. Засеянные чашки ставим в термостат.

10. Берем второй тампон и смачиваем его в расплавленной на водяной бане среде КУА.

11. Вводим в рот шпатель и прижимаем им корень языка.

12. Вводим тампон до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки.

13. После появления у обследуемого кашлевого рефлекса и выделения слизи вынимаем тампон из полости рта.

14. Вынимаем тампон и производим посев материала.

3. Носоглоточный способ взятия материала и первичный посев на чашку с питательной средой (КУА)

Оборудование: 2 стерильных тампона, растопленная на водяной бане среда КУА.

Ход работы:

1. Усаживаем пациента

2. Вынимаем первый тампон из пробирки и сгибаем под углом 120*.

3. Вводим в нос первый (сухой) тампон до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки.

4. После появления у обследуемого кашлевого рефлекса и выделения слизи вынимаем тампон из полости рта.

5. Делаем первичный посев на среду КУА в чашку Петри.

6. Сначала делаем несколько штрихов в одном месте, затем растираем материал по всей поверхности среды, со всех сторон тампона.

7. Засеянные чашки ставим в термостат.

8. Берем второй тампон и смачиваем его в расплавленной на водяной бане среде КУА.

9. Вводим в рот шпатель и прижимаем им корень языка.

10. Вводим тампон до тех пор, пока конец его не прикоснется к задней стенке глотки.

11. После появления у обследуемого кашлевого рефлекса и выделения слизи вынимаем тампон из полости рта.

12. Вынимаем тампон и производим посев материала.

Микробиологическое исследование на менингит

1. на расстоянии 3-4 см от конца.
2. Предложить пациенту широко открыть рот.
3. Надавить шпателем, который находится в левой руке, на корень языка.
4. Ввести тампон концом вверх под мягкое небо в носоглотку и осторожным движением собрать слизь.
5. Извлечь тампон, не касаясь слизистой оболочки рта и зубов.
6. Провести первичный посев в пробирке на сывороточный агар штрихообразными движениями сверху вниз.
7. Поместить пробирку с посевом в термостат.

Цифровой отчет:

Микробиологическое исследование стафилококко-6

Микробиологическое исследование на дифтерию-8

Микробиологическое исследование на коклюш-3

Микробиологическое исследование на менингит-4

Выписка направлений – 21

Заполнение журналов – 4

Выдача результатов — 21

Десятый день практики.

Методы культивирования
и выделения чистой культуры бактерий.

Для успешного культивирования, помимо правильно подобранных сред и правильно произведенного посева, необходимы оптимальные условия: температура, влажность, аэрация (снабжение воздухом). Культивирование анаэробов сложнее, чем аэробов, для удаления воздуха из питательной среды используют различные способы.
Выделение отдельных видов бактерий (чистой культуры) из исследуемого материала, содержащего, как правило, смесь различных микроорганизмов, является одним из этапов любого бактериологического исследования. Чистой культурой микробовполучают из изолированной микробной колонии.
При выделении чистой культуры из крови (гемокультуры) ее предварительно «подращивают» в жидкой среде: 10-15 мл стерильно взятой крови засевают в 100-150 мл жидкой среды. Соотношение засеваемой крови и питательной среды 1:10 не случайно — так достигается разведение крови (неразведенная кровь губительно действует на микроорганизмы).

Этапы выделения чистой культуры бактерий
I этап (нативный материал)
Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре).
Посев на плотные питательные среды (получение колоний).
II этап (изолированные колонии)
Изучение колоний (культуральные свойства бактерий).
Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке
(морфологические свойства бактерий).
Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры.
III этап (чистая культура)
Определение культуральных, морфологических, биохимических
и других свойств для идентификации культуры бактерий

Особенность микроскопирования микробов — применение исключительно иммерсионной системы, состоящей из исследуемого объекта, иммерсионных масла и объектива. Преимущество этой системы заключается в том, что между объектом на предметном стекле и фронтальной линзой объектива находится среда с одинаковым показателем преломления (кедровое, вазелиновое масло и др.). Благодаря этому достигается наилучшее освещение объекта, так как лучи не преломляются и попадают в объектив. При обычной световой микроскопии наблюдаемый объект (в том числе и микробы) рассматриваются в проходящем свете. Поскольку микробы, как и другие биологические объекты, малоконтрастны, то для лучшей видимости их окрашивают. С целью расширения границы видимости применяют другие виды световой микроскопии.

Цифровой отчет:

Выделения чистой культуры бактерий-5

Микроскопия-2

Выписка результатов-2

Одиннадцатый день практики. Подготовка сыворотки крови для серогического исследования.(инактивирование, осаждение эритроцитами барана, разведение сыворотки 1:5, 1:10)Постановка иммунологических реакций: агглютинации на стекле и объемным методом, РПГА, реакций Хедельсона и Райта. Учет иммунологических реакций. Выдача результатов. Выписка протоколов. Ведение дневников

Рекомендуемые страницы:

Комплексное исследование, направленное на диагностику коклюша и паракоклюша, а также на оценку эффективности вакцинации против коклюша.

Синонимы русские

Возбудители коклюша, паракоклюша; комплексное обследование.

Синонимы английские

Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis; comprehensive examination.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).

Как правильно подготовиться к исследованию?

• За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.

Общая информация об исследовании

Коклюш представляет собой острую антропонозную бактериальную инфекцию. Возбудитель – Bordetella pertussis (палочка Борде — Жонгу), мелкая неподвижная грамотрицательная коккобацилла, строгий аэроб. Инфекция передается воздушно-капельным путём. Источником инфекции является больной человек с любой формой инфекционного процесса.

В течении заболевания выделяют следующие периоды: инкубационный период (длительностью от нескольких дней до двух недель), катаральный (от 5-8 до 11-14 дней), пароксизмальный, или спазматический (2-8 недель), разрешения (2-4 недели) и реконвалесценции (2-6 месяцев). Наиболее характерными для коклюша являются проявления, характеризующие пароксизмальный период заболевания. К ним относятся сухой спастический кашель, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, возможна рвота, лихорадка, слабость, в гемограмме – лейкоцитоз, лимфоцитоз. Следует отметить, что наиболее тяжело заболевание протекает у детей раннего возраста, возможно развитие осложнений со стороны бронхолегочной и нервной систем. У взрослых и лиц после вакцинации коклюш чаще протекает в легкой, атипичной форме, как правило, без осложнений.

Паракоклюш – это острая бактериальная инфекция респираторного тракта, поражающая детей и взрослых. Возбудителем инфекции является аэробная палочка Bordetella parapertussis. Клинические проявления данного заболевания схожи с картиной коклюша, характерна более стертая смена периодов, легкое течение, редкое развитие осложнений, преимущественно у детей.

Диагностика коклюша и паракоклюша основана на клинико-эпидемиологических данных, результатах изменений в клиническом анализе крови и подтверждается лабораторными методами. В клинической лабораторной диагностике данных заболеваний применяют несколько методов: бактериологический метод для выявления роста колоний возбудителей коклюша/паракоклюша; серологический метод, направленный на определение суммарных антител к данным возбудителям; метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – для выявления генетического материала возбудителя коклюша.

Бактериологическое обследование является первым этапом диагностики, но позволяет выявлять возбудителей только на ранних сроках заболевания, в первые 2-3 недели.

Метод ПЦР является высокоэффективным в диагностике коклюша, позволяет выявлять фрагменты ДНК возбудителя B. pertussis в исследуемом биоматериале, обладает высокой диагностической специфичностью, достигающей 100 %. Использование данного метода рекомендовано в первые три недели от начала клинических проявлений заболевания, то есть в катаральный и ранний пароксизмальный период. В более поздние сроки заболевания диагностическая чувствительность метода падает. Следует отметить, что в отличие от других лабораторных методов ПЦР эффективна на фоне лечения антибактериальными препаратами. Также она используется при обследовании детей раннего возраста, в отличие от более старших детей и взрослых, когда возможно возрастание числа ложноположительных результатов. У лиц, вакцинированных против коклюша, положительный результат данного метода может свидетельствовать о транзиторном носительстве патогена, а не об активной форме заболевания.

Серологическое обследование позволяет выявлять в сыворотке крови специфические антитела, направленные к антигенам возбудителей B. pertussis и B. parapertussis. Они могут быть обнаружены с помощью реакции непрямой гемагглютинации (РНГА).

При выборе РНГА в качестве диагностического теста при подозрении на коклюш и паракоклюш следует учитывать клинический период заболевания, возраст пациента и наличие предшествующей вакцинации. Для подтверждения диагноза необходимо определение нарастания титра антител в четыре и более раза в парных сыворотках, взятых с интервалом 10-14 дней. Реакцию ставят параллельно с коклюшным и паракоклюшным антигеном. Серологическое обследование рекомендовано применять в период 3-6 недель от начала первых клинических симптомов заболевания, характеризующий пароксизмальный период коклюша. Данный метод не рекомендуется применять детям до 3 месяцев, так как иммунная система новорождённых в это время ещё незрелая и могут быть обнаружены материнские антитела в низких титрах. Также не рекомендуется проводить серологическое исследование лицам в течение 1 года после вакцинации против коклюша вследствие невозможности различить иммунный ответ на вакцинацию или на первичную инфекцию. Титр антител к B. pertussis может быть определен для оценки эффективности прививки против коклюша у детей.

Для чего используется исследование?

• Для комплексной лабораторной диагностики коклюша и паракоклюша.
• Для диагностики коклюша в первые три недели от начала заболевания, характеризующие катаральный и ранний пароксизмальный период, а также на фоне лечения антибактериальными препаратами.
• Для диагностики коклюша и паракоклюша в спазматический (пароксизмальный) период заболевания.
• Для оценки эффективности вакцинации против коклюша.

Когда назначается исследование?

• При клинических проявлениях коклюша/паракоклюша: сухой спастический кашель, сопровождающийся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом носогубного треугольника, акроцианоз, лихорадка, слабость, насморк, слезотечение.
• При обследовании лиц, находившихся в тесном контакте с больными коклюшем/паракоклюшем.
• При оценке эффективности вакцинации против коклюша.

Что означают результаты?

Референсные значения

1. anti-Bordetella pertussis

Результат: отрицательный.

Титр: 1:80 – условно-защитный титр у невакцинированных лиц; 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.

2. anti-Bordetella parapertussis

Результат: отрицательный.

Титр:

3. Bordetella pertussis, ДНК

Результат: не обнаружено.

Причины положительного результата:

• коклюш;
• паракоклюш;
• транзиторное носительство;
• иммунный ответ после вакцинации.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие коклюша/паракоклюша;
• неэффективная вакцинация против коклюша;
• снижение иммунологического ответа после вакцинации;
• ложноотрицательные результаты.

Что может влиять на результат?

• Клинический период заболевания, возраст пациента, наличие предшествующей вакцинации;
• применение антибактериальных препаратов в зависимости от стадии (периода) заболевания и применяемого метода лабораторной диагностики;
• особенности иммунного ответа у новорождённых детей;
• предшествующая вакцинация.



Важные замечания

• При интерпретации результатов обследования необходимо учитывать методы диагностики, возраст пациентов, клиническую стадию (период) заболевания, предшествующую вакцинацию.
• Для комплексной оценки полученных результатов их необходимо сопоставлять с эпидемиологическими, клиническими и другими лабораторными данными.

Также рекомендуется

• Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
• Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, педиатр, пульмонолог, оториноларинголог, терапевт, врач общей практики.

Литература

1. Ghanaie RM, Karimi A, Sadeghi H, Esteghamti A, Falah F, Armin S, Fahimzad A, Shamshiri A, Kahbazi M, Shiva F. Sensitivity and specificity of the World Health Organization pertussis clinical case definition / Int J Infect Dis. 2010 Dec;14(12):e1072-5.
2. Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
3. Piekarska K, Rzeczkowska M, Rastawicki W, Dąbrowska-Iwanicka A, Paradowska-Stankiewicz I.Usefulness of laboratory methods in diagnosis of pertussis in adult with paroxysmal cough / Przegl Epidemiol. 2014;68(4):633-6.
4. Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.
5. Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
6. Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша. – Методические рекомендации МР 3.1.2.0072-13.