Анализ на коклюш пцр
Содержание статьи
Коклюш, ДНК возбудителя (Bordetella pertussis, ПЦР) соскоб, кач. в Москве
Код 19.38. Соскоб
- Приём, исследование биоматериала
- Показания к назначению
- Описание
Приём и исследование биоматериала
Приём материала
- Можно сдать в отделении Гемотест
- Можно сдать анализ дома
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция
Формат представления результата
Качественный
Когда нужно сдавать анализ Коклюш, ДНК возбудителя (Bordetella pertussis, ПЦР) соскоб, кач.?
Диагностика коклюша.
Обследование контактных по коклюшу лиц.
Дифференциальная диагностика коклюша и паракоклюша.
Подробное описание исследования
Исследование качественное, проводится методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) и позволяет обнаружить ДНК Bordetella pertussis. Используется для диагностики коклюша.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод, позволяющий идентифицировать ДНК возбудителя даже в очень малом количестве. Исследование используется для ранней диагностики заболевания: оптимальным сроком для сдачи анализа являются первые 10-14 дней.
Bordetella pertussis (Бордетелла пертуссис) — бактерия, возбудитель коклюша. Микроорганизм неустойчив во внешней среде, поэтому для заражения требуется длительный и близкий контакт с больным человеком или носителем возбудителя. Путь передачи инфекции — воздушно-капельный.
Характерные признаки коклюша:
спазматический «лающий» сухой кашель;
отсутствие первичной лихорадки;
цикличность развития;
нарастание симптомов в течение болезни.
Чаще всего болеют дети до 5 лет. Восприимчивость также повышается во время беременности. Для взрослых характерно атипичное течение.
У коклюша выделяют четыре периода:
инкубационный — скрытый, бессимптомный;
катаральный — длится 7-14 дней, характеризуется кашлем, насморком, гиперемией зева и повышением температуры тела до 38 ºС;
спазматический — продолжается 3-4 недели; в это времяпроисходит увеличение силы и продолжительности кашля, учащение приступов, которые иногда доходят до рвоты;
обратного развития — через 3-4 недели приступы становятся реже, симптомы болезни исчезают.
Что ещё назначают с этим исследованием?
Использованная литература
- Клинические рекомендации: Коклюш у детей — 2019.
Инфекции дыхательных путей. Диагностика коклюша и паракоклюша. — Методические рекомендации МР 3.1.2.0072-13.
Клинические рекомендации (протокол лечения) оказания медицинской помощи детям больным коклюшем — 2013.
- Подготовка к исследованию
- Противопоказания и ограничения
Подготовка к исследованию
С момента прекращения приема антибиотиков до взятия биоматериала должно пройти не менее 2 недель.
Соскоб из зева сдают натощак или не ранее чем через 2 часа после последнего приема пищи.
Противопоказания и ограничения
Абсолютных противопоказаний нет.
- Интерпретация результата
- Референсные значения
- Аналитические показатели
Интерпретация результата
Положительный результат: обнаружение в материале фрагментов ДНК Bordetella pertussis говорит о наличии коклюша или транзиторного носительства бактерии.
Отрицательный результат: отсутствие следов возбудителя в биоматериале свидетельствует об отсутствии заболевания.
Референсные значения
Не обнаружена.
Аналитические показатели
Аналитическая чувствительность 1х10*3 ГЭ/мл.
Bordetella pertussis (возбудитель коклюша).
Специфичность метода — 100%.
Источник
Bordetella pertussis, ДНК [ПЦР]
[09-038] Bordetella pertussis, ДНК [ПЦР]
425 руб.
Выявление возбудителя коклюша (Bordetella pertussis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в биоматериале.
Синонимы русские
Палочка коклюша, бактерия Борде — Жангу [полимеразная цепная реакция].
Синонимы английские
Whooping cough, B. pertussis, DNA [Polymerase chain reaction].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из носоглотки, мазок из зева (ротоглотки).
Как правильно подготовиться к исследованию?
- За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
Общая информация об исследовании
Bordetella pertussis (B. pertussis) — это грамотрицательная аэробная коккобацилла, являющаяся возбудителем коклюша. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Риск заболеть наиболее высок у не вакцинированных АКДС детей и беременных женщин. Следует отметить, что прививка АКДС не обеспечивает стопроцентную защиту от заражения, так как иммунный ответ постепенно угасает в течение 1-3 лет после вакцинации. В этой связи подростки и взрослые, вакцинированные более чем 3 года назад и находившиеся в тесном контакте с больным коклюшом или носителем B. pertussis, также подвергаются риску заражения.
В клинической практике применяют несколько лабораторных тестов для диагностики коклюша: посев на питательную среду, метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), серологические методы и исследование с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР — метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в носоглоточном аспирате) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции и наиболее точно и быстро диагностировать коклюш.
Специфичность ПЦР достигает 100 %, что обусловлено использованием в реакции специфичной именно для B. pertussis пары праймеров. Положительный результат у пациента с признаками поражения респираторного тракта позволяет подтвердить диагноз «коклюш» и исключить наличие других бактериальных (в том числе паракоклюша) и вирусных заболеваний.
Исследование с помощью ПЦР характеризуется высокой чувствительностью, превосходящей чувствительность бактериологического метода, ПИФ и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Следует, однако, заметить, что она зависит от клинической стадии заболевания, в которую был взят биоматериал, от возраста пациента и предшествующего лечения.
В течении коклюша можно выделить 4 стадии: инкубационный период, катаральную, пароксизмальную стадию и стадию выздоровления. ПЦР является предпочтительным методом идентификации возбудителя при подозрении на коклюш в катаральную и раннюю пароксизмальную стадию (около 4 недель после появления первых симптомов). В этот период чувствительность ПЦР максимальна и превосходит чувствительность бактериологического метода. По прошествии более 3-4 недель чувствительность ПЦР несколько снижается. Это имеет особое значение при диагностике заболевания у взрослых пациентов, которые, как правило, игнорируют первые симптомы болезни, характерные для катаральной стадии, и обращаются за помощью в более поздние сроки, в пароксизмальную стадию. При диагностике коклюша в позднюю пароксизмальную стадию и при выздоровлении наиболее точные результаты будут получены при комбинации серологических исследований (например, РНГА) и исследования с помощью ПЦР.
Также ПЦР оптимальна для диагностики коклюша у младенцев, хотя у детей старшего возраста, а также подростков и взрослых она характеризуется большим числом ложноотрицательных результатов. Так, ее чувствительность при взятии биоматериала в первые 10 дней болезни в возрастных группах до 1 года, 1-4 года и старше 5 лет составила 70, 50 и 10 % (для сравнения: чувствительность «золотого стандарта» диагностики коклюша — посева на питательную среду — в этот период не превышает 60 %). В качестве биоматериала для диагностики коклюша у младенцев предпочтителен носоглоточный аспират. У детей старшего возраста, подростков и взрослых берут мазки из носоглотки и зева. Использование тампона из кальция альгината в этом случае не рекомендуется.
В отличие от других лабораторных методов, точность ПЦР в меньшей степени зависит от приема антибактериальных препаратов. Так, чувствительность метода при взятии биоматериала на 4-й день лечения эритромицином составила 89 % (бактериологического посева — 56 %), на 7-й день — 56 % (посева — 0). Поэтому ПЦР чаще выбирают для выявления B. pertussis у пациентов в катаральной стадии заболевания, если биоматериал сдается на фоне начатого лечения. Результаты теста при сдаче биоматериала на фоне лечения в пароксизмальную стадию во многих случаях ложноотрицательные.
Исследование с помощью ПЦР с успехом применяется у вакцинированных АКДС пациентов. При этом идентификация B. pertussis в мазках этой группы может означать транзиторное носительство, но не активную инфекцию, поэтому результаты ПЦР рекомендуется оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики коклюша, особенно у младенцев в период катаральной и ранней пароксизмальной стадии заболевания.
Когда назначается исследование?
- При симптомах коклюша в катаральной стадии: лихорадка, насморк, заложенность носа, слезотечение.
- При симптомах коклюша в пароксизмальной стадии: приступы интенсивного кашля, сопровождающиеся глубоким свистящим вдохом, рвотой, цианозом кожи лица.
- При обследовании пациента, находившегося в тесном контакте с больным коклюшем.
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
- коклюш;
- транзиторное носительство.
Причины отрицательного результата:
- отсутствие коклюша;
- ложноотрицательные результаты чаще наблюдаются при сдаче биоматериала в позднюю пароксизмальную стадию и стадию реконвалесценции, на фоне лечения антибиотиками.
Что может влиять на результат?
- Стадия заболевания — наиболее точный результат будет получен при сдаче анализа в первые 3-4 недели после начала заболевания.
- Возраст пациента — наиболее точный результат будет получен при обследовании пациентов в возрасте до 1 года.
- Применение эритромицина и других антибиотиков может приводить к ложноотрицательным результатам.
Важные замечания
- Анализ не предназначен для оценки эффективности лечения.
- Результат исследования следует оценивать с помощью дополнительных эпидемиологических, клинических и лабораторных данных.
Также рекомендуется
- Посев на Bordetella pertussis/parapertussis
- anti-Bordetella pertussis, anti-Bordetella parapertussis
- Лейкоцитарная формула
Кто назначает исследование?
Инфекционист, педиатр, пульмонолог, врач общей практики.
Литература
- Laboratory manual for the diagnosis of whooping cough caused by Bordetella pertussis / Bordetella parapertussis. World Health Organization. Dept. of Immunization, Vaccines and Biologicals. WHO/IVB/04.14, 2004.
- Müller FM, Hoppe JE, Wirsing von König CH. Laboratory diagnosis of pertussis: e of the art in 1997. J Clin Microbiol. 1997 Oct;35(10):2435-43.
- Riffelmann M, Wirsing von König CH, Caro V, Guiso N; Pertussis PCR Consesus Group. Nucleic Acid amplification tests for diagnosis of Bordetella infections. J Clin Microbiol. 2005 Oct;43(10):4925-9.
- Lind-Brandberg L, Welinder-Olsson C, Lagergård T, Taranger J, Trollfors B, Zackrisson G. Evaluation of PCR for diagnosis of Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis infections. J Clin Microbiol. 1998 Mar;36(3):679-83.
- Dalby T, Krogfelt KA. Laboratory diagnosis of pertussis: agglutination is not suitable. Respirology. 2011 Nov;16(8):1160-2.
Источник
Анализ на коклюш — какой сдать?
Для диагностики коклюша в современное время доступно большое количество тестов и анализов, но как правильно выбрать необходимый и самый точный из них?
Итак, многие специалисты по всему миру рекомендуют:
Если кашель у подростков и взрослых длится менее двух недель, а у детей менее трёх недель то, целесообразно воспользоваться микробиологическими методами (посев) или методами амплификационной диагностики (полимеразно-цепная реакция, ПЦР) [1,2].
Если кашель у детей и взрослых длится более двух недель и в течение текущего года не проводилась вакцинация против коклюша то, целесообразно воспользоваться серологическими методами диагностики (например, иммуноферментным анализом, ИФА) [1,2].
Теперь немного подробнее о важных особенностях каждого метода.
1. Полимеразно-цепная реакция (ПЦР).
Необходимый материал для анализа — назофарингеальный мазок, но предпочтительнее использовать образец слизи из носоглотки [3]. Как правильно выполнить мазок представлено в нашем канале в телеграме (@pediatrics_rus).
ПЦР необходимо проводить в течение первых двух-трёх недель от начала кашля, так как спустя четыре недели от начала заболевания количество бактерий B.pertussis в носоглоточном секрете стремительно снижается, также количество бактерий снижается, если проводилась антибактериальная терапия (более 5 дней [4]).
У младенцев и ранее не привитых детей ПЦР допустимо выполнять в течение первых четырёх недель от начала кашля [4,5].
Для большей точности ПЦР всегда рекомендуется проводить параллельно с посевом [1], следовательно, при заборе материала следует брать два образца одномоментно — один для ПЦР, другой для посева. Зачем? ПЦР может давать ложноположительные результаты, так как определяет только наличие или отсутствие ДНК возбудителя, а не наличие живых форм [6].
При заборе ПЦР рекомендуется пользоваться палочками из нейлона, рэйона и полиэстера. При использовании хлопковой ваты возбудитель гибнет [7].
При подозреваемом коклюше важно проводить дифференциальную диагностику с аденовирусной, бокавирусной инфекциями, гриппом, парагриппом, M.pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae и прочими инфекциями [8].
ПЦР не рекомендуется проводить лицам, контактировавшим с больным коклюшем при отсутствии каких-либо симптомов [7].
2. Посев.
Посев на питательную среду — золотой стандарт диагностики коклюша [1-4].
Высокая вероятность получения наиболее точного результата отмечается у лиц, страдающих кашлем менее двух недель, если для лечения ещё не применялись антибактериальные препараты и, если вакцинация против коклюша проводилась более 12 месяцев назад [4].
Необходимый материал для проведения посева — отделяемое носоглотки.
Возбудитель коклюша — B.pertussis является очень чувствительным и привередливым микроорганизмом, поэтому рекомендуется, чтобы медперсонал строго следовал инструкции и соблюдал технику забора материала для анализа.
В среднем результат посева может быть готов через 4-10-14 дней [9,10], всё зависит от возможностей лаборатории. У ранее не болевших и не привитых против коклюша предварительный результат посева может быть готов уже через 72-96 часов [9,11].
Большим преимуществом посева является то, что можно определить чувствительность микроорганизма к антибиотикам и, следовательно, правильно подобрать препараты для последующего лечения. Кроме того, по данным посева, можно определить, какой конкретно штамм бактерии циркулирует на определённой территории и оценить эффективность применяемой вакцины [12].
3. Иммуноферментный анализ (ИФА).
В случае поздней диагностики, когда кашель длится более 3-4 недель и/или уже начата или проведена антибиотикотерапия, для лабораторного подтверждения коклюша можно воспользоваться серологическими методами диагностики, например, иммуноферментным анализом (ИФА).
При помощи ИФА можно определять антитела классов IgM, IgA и IgG к различным антигенам возбудителя: коклюшному токсину (PT), филаментозному гемагглютинину (FHA), пертактину (PRN). Наиболее специфичным антигеном является коклюшный токсин, так как это единственный антиген, который характерен только для B.рertussis [12]. Остальные антигены могут присутствовать и у других представителей Bordetella.
У 25% младенцев и 10% подростков антитела к коклюшному токсину (РТ) могут отсутствовать [2,3].
Серологическое исследование для диагностики коклюша можно использовать с 3 до 12 недель с момента начала кашля [13,14]. Материалом для исследования является кровь.
Лабораторная диагностика коклюша и рекомендуемые временные интервалы для выполнения различных анализов
Какой класс антител лучше определять?
1. Антитела класса IgM.
- Свидетельствуют об остром инфекционном процессе.
- Образуются не раньше второй недели от начала заболевания, следовательно, их определение раньше этого срока нецелесообразно [9,14].
- У некоторых детей и взрослых независимо от наличия вакцинации или перенесённого ранее заболевания антитела класса IgM могут вырабатываться в малом количестве и не определяться по данным анализа [9].
- Если определение IgM проводилось в первые две недели от начала заболевания и результат был отрицательным, то рекомендуется повторить анализ спустя 10-14 дней. Если отрицательный результат получен спустя 14 дней от начала заболевания, то смысла переделывать анализ нет, так как с течением времени количество IgM только уменьшается.
2. Антитела класса IgG.
- Обнаруживаются на третьей неделе от начала заболевания, достигают своего наибольшего значения на 6-8 неделе болезни, после чего их уровень постепенно снижается [9].
Определение специфических IgG является наиболее распространённым и стандартизированным методом при серологической диагностике коклюша [2,3]
- Для более точной диагностики при определении IgG рекомендуется использовать парные сыворотки, так как по данным одного анализа сложно сделать достоверный вывод, ведь неизвестно с чем связано присутствие IgG — с заболеванием или проведенной ранее вакцинацией.
- Рекомендуемый интервал между исследованиями составляет 10-14 дней. Результат считается положительным при нарастании титра в 2-4 и более раз [3,9,15].
Определение титра антител — оптимальный метод диагностики коклюша у ранее иммунизированных подростков и взрослых [1,9].
Определение IgG рекомендуется, если в течение текущего года (12 месяцев) не проводилась вакцинация против коклюша [1,9].
- При исследовании однократно взятой сыворотки (даже у ранее привитого более 12 месяцев назад взрослого или ребёнка) результат по обнаружению антител класса IgG может быть расценен как положительный только в случае высокого титра (точное значение необходимо уточнять в лаборатории, так как данные разнятся в зависимости от техники анализа и используемых реагентов) [14].
Во вкладке «Дополнительные материалы» ниже можно скачать памятку об особенностях лабораторной диагностики коклюша в формате pdf.
4. Клинический анализ крови.
В общем анализе крови при коклюше характерно увеличение количества лейкоцитов и лимфоцитов [1-4]. Количество лимфоцитов увеличивается под действием токсина коклюшной палочки [2], однако отсутствие повышения лейкоцитов не исключает коклюш. Клинический анализ крови является только дополнительным методом диагностики [5].
Имеются данные, что если по результатам клинического анализа крови у ребёнка определяется более 10 000 лейкоцитов в 1 мкл и более чем 50% из них составляют лимфоциты, то диагноз коклюша можно рассматривать как вероятный (конечно, при наличии характерной клинической картины) [16]. Если в повторном анализе — через 24 часа — отмечается повышение лейкоцитов более 20 000 в 1 мкл и из них более чем 50% лимфоцитов, то это свидетельствует о том, что вероятность коклюша крайне высока [16].
При оценке клинического (общего) анализа крови у маленьких детей также следует помнить, что если в течение беременности мама младенца прививалась от коклюша, то повышения лейкоцитов может и не быть [16].
5. Дополнительные обследования.
В связи с риском развития осложнений у детей первого года жизни в случае госпитализации рекомендуется выполнять рентгенографию органов грудной клетки (из-за риска пневмонии) и эхокардиограмму (из-за риска лёгочной гипертензии). Остальные исследования — по показаниям.
Подробнее о симптомах коклюша и его лечении можно прочитать в наших статьях по тегу #коклюш.
Источник